日前,由淡水漁業(yè)研究中心生物技術(shù)研究室丁煒東副研究員等人發(fā)明的“黃鱔雌激素受體α基因、編碼蛋白及酶聯(lián)免疫檢測方法”獲得國家發(fā)明專利授權(quán),專利號:ZL201410180865.0。 本發(fā)明采用RT-PCR方法獲得黃鱔性腺中ERα序列,選擇其抗原性較強(qiáng)的氨基酸序列相對應(yīng)的cDNA序列作為模板克隆到長約945bp的序列,并將其克隆到pMAL-c2x表達(dá)載體中,通過IPTG誘導(dǎo),Amylose-sepharose柱的純化,獲得了較純的具有免疫活性的重組蛋白,采用FactorXa蛋白酶切、進(jìn)一步純化后,獲得了可作為免疫原的ERα表達(dá)蛋白。免疫小鼠后,獲得較高滴度的抗血清,并初步進(jìn)行了免疫組化研究,表明該抗血清能特異與黃鱔性腺中的ERα蛋白結(jié)合,在卵母細(xì)胞膜上呈陽性反應(yīng),為進(jìn)一步研究黃鱔性別發(fā)展中雌激素及其ERα等作用打下了基礎(chǔ)。本發(fā)明還以此抗體為基礎(chǔ)制備了ELISA檢測試劑盒。
(生物技術(shù)研究室 供稿)
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